DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFEC IILOR VIRALE

  • Published on
    03-Jan-2016

  • View
    31

  • Download
    0

DESCRIPTION

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFEC IILOR VIRALE. DIAGNOSTICUL INFECIILOR VIRALE. Argumente: clinice (sdr. clinic, debut, evoluie, patologia asociat) epidemiologice (vrsta, sex etc.) laborator. DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALE. Indicaii: Alegerea terapiei etiotrope - PowerPoint PPT Presentation

Transcript

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALE

  • DIAGNOSTICUL INFECIILOR VIRALEArgumente:clinice (sdr. clinic, debut, evoluie, patologia asociat)epidemiologice (vrsta, sex etc.)laborator

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALEIndicaii:Alegerea terapiei etiotropeMonitorizarea eficienei terapieiAdoptarea msurilor de profilaxie i combatere n focar a unor boli contagioaseSupravegherea epidemiologic a unor boli infecioase

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALENejustificat (tardiv, fr consecine terapeutice)?Inaccesibil (infrastructur complex, personal nalt calificat)?Costisitor ?

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALEn prezent:Justificat i necesar (metode de diagnostic rapid, antivirale eficiente)Accesibil (cel puin pentru anumite metode)Cost / eficien

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALEIndicaii:Iniierea i monitorizarea terapiei antivirale (v. gripale, HSV1, HSV2, CMV, HIV, HBV, HCV) Stabilirea conduitei terapeutice sau profilactice (herpes genital prepartum, infecie cu v. rubeolic, HIV la gravid)

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALEAdoptarea msurilor de profilaxie i combatere n focar a unor boli contagioase (HAV)Supravegherea epidemiologic i adoptarea msurilor de sntate public (triajul donatorilor de snge i organe, supravegherea epidemiilor gripale, SARS)Evidenierea unor infecii noi, virusuri noi sau a unor noi asocieri virus-boal

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALETipuri de laboratoare:Laboratoare cliniceInstitute de Sntate PublicCentre de referin

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALE METODE NESPECIFICE METODE SPECIFICE Metode directeex microscopic (ME, IF)evidenierea antigenelor viraleevidenierea secvenelor ac. nucleicizolarea - identificareaex. citologic (MO)Metode indirecteevidenierea anticorpilor specifici

  • DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL INFECIILOR VIRALE - ETAPECooperarea clinician medic de laborator!Alegerea celui mai potrivit test (contextul clinico-epidemiologic)Alegerea produsului patologic Tipul (sdr. clinic, stadiul bolii)Momentul prelevrii Metoda de recoltare i transport

  • PRODUSE PATOLOGICE UTILIZATE N DIAGNOSTICUL VIROLOGIC Sdr respiratorii: exsudat nazal, exsudat faringian, lichid de spltur nazal, sputSdr digestive: materii fecale, tampon rectalRash vezicular: lichid vezicular, produs de raclajInfecii urinare: urinInfecii oculare: raclat conjunctival sau corneean, exsudat faringianSdr meningian/ encefalitic: LCR, biopsie cerebral, materii fecale, saliv, esuturiSnge

  • MOMENTUL PRELEVRII N DIAGNOSTICUL VIROLOGICOPTIM primele 2 3 zile de la debutul bolii (diagnostic direct)!

  • PRELEVAREA N DIAGNOSTICUL VIROLOGICTipul produsului patologicExpediere imediatMediu de transportRefrigerare (+4 +8 C), nu congelare (-15 -20 C)

  • Lichid amniotic: se aspira lichidul cu seringa si se injecteaza apoi intr-un tub steril. Scop: cultivare virusuriSange periferic: se decontamineaza tegumentul. Se folosesc tuburi cu heparina sodicScop: cultivare virusuriBiopsie cerebrala: probele se transporta in mediu de transport M4Scop: cultivare, PCR pentru VHSBronhoscopie: se recomanda aspirarea secretiilor prin camera interioara a bronhoscopului intr-un recipient steril cu 1 ml solutie salina. Se transporta imediat la laborator.Scop: cultivare virusuri

  • Cervix: se foloseste speculum fara lubrifiant. Se indeparteaza excesul de mucus si puroi cu ajutorul tampoanelor de descarcare. Se introduce un tampon mic in endocervix si se roteste pentru 15 30 secunde. Se evita atingerea peretilor vaginali cu tamponul. Se comprima usor cervixul intre lamele speculului si se exprima puroiul eventual existent. Se introduce tamponul intr-un tub de colectie. Daca sunt prezente leziuni, acestea se comprima cu un alt tampon, care se introduce intr-un mediu de transport M4.Scop: cultivare virusuri si PCR

  • Cornee: raclajul corneean este realizat de catre medic. Este indicat a se introduce raclatul in mediu de transport M4Cultivare VHSLCR: se decontamineaza pielea. Se realizeaza punctie lombara, ventriculara sau suboccipitala. Se strimite LCR intr-un tub steril cu capac insurubat. Nu se foloseste mediu M4. Se transporta in laborator imediat dupa prelevare.Cultivare virus si PCR pentru Herpes Simplex VirusUreche interna: se curata canalul extern cu antiseptic cu actiune medie. Se preleva puroiul aseptic.Cultivare virusOchi (extern): se indeparteaza machiajul. Se antiseptizeaza tegumentul din jurul ochilor cu antiseptic slab. Se trece de 2 ori un tampon umed la nivelul conjunctivei. Evitati atingerea pleoapelor. Se foloseste mediu de transport M4. Cultivare virus

  • Leziuni herpetice: se sterge viguros baza unei vezicule deschise cu un tampon, se trimite produsul in mediu de transport M4. Cultivare VHS, PCRBiopsie pulmonara: se decontamineaza tegumentul. Se efectueaza doar de catre specialist. Se trimite produsul la laborator in mediu de transport M4.Cultivare virusSpalatura nasala / aspirat nasal: capul pacientului este indicat a fi inclinat sub un unghi de 70. Se aspira in seringa 1 ml solutie salina. Se introduce lichidul in narine. Se colecteaza lichidul si se reintroduce de cateva ori. La final se colecteaza lichidul de spalatura intr-un tub steril insurubat. Se trimite imediat la laborator. Detectarea rapida de virus gripal este posibila in sezon epidemic.Cultivare virus gripal, virus respirator sincitial.

  • Nasofaringe: se introduce un tampon subtire, in nasofaringe, in cavitatea nasala. Se tine tamponul aproape de septul nasal. Se roteste tamponul si se retrage. Se transporta imediat la laborator. Se foloseste mediu de transport M4. Cultivare virus; detectare VRSLichid pericardic, pleural, peritoneal: se decontami-neaza tegumentul. Se recomanda aspirarea sterila a cativa ml intr-o seringa. Se introduce lichidul intr-un recipient steril, cu capac.Cultivare virusRash: se curata suprafata cu alcool 70%. Se instileaza o cantitate mica de solutie salina si apoi se aspira intr-un tub steril. Se foloseste mediu de transport M4. Pentru rash vezicular se cur viguros cu un tampon baza veziculelor proaspete.Cultivare virus si IF directa pentru V Varicella Zoster

  • Tampon rectal: in timpul proctoscopiei sau sigmoidoscopiei se ating cu tamponul leziunile de la acest nivel. Se introduce tamponul in mediu de transport M4. Cultivare virusLichid unt: se decontamineaza tegumentul si cateterul. Se aspira steril de la nivelul untului si se conditioneaza intr-un recipient steril.Cultivare virusMaterii fecale: se colecteaza in recipiente curate, uscate, cu capac. Daca se recolteaza in plosca, se evita contamina-rea cu urina sau dezinfectante. Transportul nu trebuie sa depaseasca 1 ora. Cultivare virus. Detectie Rotavirus (e.g. LA).

  • Faringe: tampon de la nivelul exudaului faringian sau al membranelor formate. Se sterg viguros criptele amigdaliene. Nu se atinge mucoasa bucala sau limba!Cultivare virusesut: se recolteaza de catre medic Cultivare virusAspirat traheal: secretiile se transporta in container steril. Cultivare virus

  • Secretie uretrala: se recolteaza la o ora dupa ultima mictiune. Se introduc tampoane subtiri de 2 4 cm in uretra si se rotesc timp de 3 5 secunde. Se depune tamponul intr-un tub colector. Pentru VHS se foloseste mediu de transport M4. PCR pentru VHS2; Cultivare VHSUrina de la nivelul cateterului: se dezinfecteaza tubul cu alcool. Se aspira urina cu o seringa sterila. Se transporta in container steril. Se refrige-reaza imediat.Cultivare virusUrina suprapubiana / citoscopie: se realizeaza recoltarea de catre medic intr-un recipient steril; se refrigereaza imediat.Cultivare virus

  • Vagin: se foloseste speculum cu lubrifiant. Se introduce un tampon steril in vagin. Mediu M4 pentru VHS.Cultivare VHS, PCRVulva: nu se foloseste alcool pentru membranele mucoase. Tegumentul se antiseptizeaza. Se colecteaza cu tamponul sau se aspira cu seringa. Mediu M4 pentru VHS. Cultivare VHS, PCR

  • Diagnosticul directExaminarea direct a produselor patologiceDetectarea de antigene: Evidentiere de virus / ME si IEMimunofluorescen (IF), teste imunenozimatice (ELISA enzime linked immunosorbent assay); latex aglutinarea (LA);Detectarea genomuluiPCR si RT-PCR

  • Diagnosticul directIn examinarea direct, produsele patologice sunt examinate pentru evidenierea:virusului; antigenelor virale;a genomului;modificrilor histopatologice induse de ctre infecia viral.

  • Diagnosticul directAvantaje: examinarea direct este rapid, rezultatele fiind obinute n aceeai zi, mai ales n scopul instituirii chimioterapiei.Dezavantaje: costul ridicat al tehnicilor, personalul de laborator nalt calificat, fac din aceste metode apanajul laboratoarelor de cercetare sau special echipate. Tehnicile de biologie molecular au devenit, n ultimul timp, din ce n ce mai accesibile, iar sensibilitatea i specificitatea lor, dublat de automatizarea metodei, depesc aceste inconveniente.

  • Diagnosticul directScderea preului de cost per determinare reprezint soluia de viitor pentru extinderea lor pe scar mai larg.Prin dezvoltarea tehnologiilor tip DNA chip se vor putea detecta virusuri direct n produsul patologic (PP), cu posibilitatea cuantificrii lor, n vederea monitorizrii terapiei antivirale.

  • MetodeMicroscopia electronic (ME) pentru evidenierea morfologiei i dimensiunilor virusurilor i identificarea acestora utiliznd imunoelectron-microscopia (IME).Microscopia optic: modificri histopatolgice i evidenierea de incluzii.Detectarea genomului viral: hibridizarea i reacia de amplificare genic (PCR polymerase chain reaction).

  • Izolarea virusurilor

    Culturi de celule: evidenierea efectului citopatic (ECP) produs de ctre virusuri citopatogene; identificarea virusului izolat prin IF, reacia de neutralizare (RN), testul de hemadsorbie, RIA, etc.Izolarea pe ou embrionate n dezvoltare: evidenierea de pocksuri la nivelul membranei chorioalantoidiene (MCA), urmat de identificarea prin RIH.Izolarea pe animale de laborator determin decesul sau reproducerea bolii la animal, urmat de obinerea de seciuni histologice i examinarea lor prin MO pentru evidenierea unor leziuni caracteristice i identificarea de antigene prin RN, RIH, etc.

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGICMicroscopia electronic (ME) sensibilitate redus (106-7 virioni/ml) personal specializat i infrastructur complex cost ridicat utilizare limitat

  • Microscopia electronic (ME)presupune un laborator dotat cu ME cu putere de mrire ntre 20000-40000X sau 50000-60000X. Pe lng dezavantajele legate de echipamentul scump, al necesitii de personal nalt calificat i al costurilor ridicate pentru reactivi i ntreinerea ME, tehnica are i dezavantajul unei sensibiliti reduse, deoarece limita de detecie presupune prezena virusului n PP n cantitate de aproximativ 106 particule virale/ml.

  • Microscopia electronic (ME)Avantaje: rapiditatea detectrii virusurilor i utilitatea descrierii morfologiei virusurilor; uneori reprezint singura metod de diagnostic, aa cum s-a ntmplat n cazul descrierii coronavirusului recunoscut, ulterior, ca agent etiologic al SARS (sindromul acut respirator sever).Dezavantaje: sensibilitatea redus, cost ridicat, similitudini morfologice ntre diferite virusuri, imposibilitatea identificrii serotipului.

  • Microscopia electronic (ME)Produse patologice utile pentru detecia de virus: materii fecale (MF) pentru rotavirusuri, adenovirusuri, virusul Norwalk i virusurile Norwalk-like, astrovirusuri, calicivirusuri; lichid vezicular pentru VHS i VVZ;produs din leziunile cutanate pentru papillomavirusuri, virusul orf, moluscum contagiosum.

  • Picornavirusuri

  • IMECreste sensibilitatea si specificitatea MEVariante ale IME:IEM clasic: proba este tratat, anterior examinrii la ME cu un ser specific cu Ac monoclonali, anti-virus presupus prezent n PP. Particulele virale, prezente n probe vor aglutina i n final, se vor agrega, datorit specificitii reaciei Ag-Ac;IEM n faz solid: grila ME, (sau alt suport), va fi coafat cu Ac monoclonali; particulele virale, prezente n PP vor fi adsorbite la suprafaa grilei prin intermediul Ac-lor.

  • Microscopia optic:Evidentiaza modificri histopatolgice i evidenierea de incluzii Incluziile cu diferite localizri:intranucleare i/sau intracitoplasmatice,eozinofile sau bazofile, cu variate forme rotunde, alungite, piriforme, etc. reprezint doar un reper orientativ i nu unul patognomonic.

  • Infectii cu VHS (incluzii IN)

  • Leziuni determinate de VHS. Sageata verde indica incluzii IN, cea albastra , celule keratinizate, iar cea rosie, celule binucleate, cu incluzii iN.

  • Sageata rosie - incluzii IN, albastra, degenerarea celulelor cu balonizare (aspect generat de VHS, keratinocite, multinucleate).

  • VVZ incluzii IN

  • V. rabic incluzii IC (bazofile)Coloratie HE

  • Incluzii Babes-Negrigranule albastru-inchis la nivelul incluziilor (coloratie Sellers)

  • VRS sincitii si incluzii eozinofile i.c.

  • Infectie HIV celule nervoaseIncluzii Cowdry A, IN si IC eozinofile (coloratie HE)

  • joi

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGICDetecia i identificarea antigenelor virale imunofluorescen imunohistochimie metode imunoenzimatice latexaglutinare reacii de neutralizare, fixare a complementului, inhibare a hemaglutinrii

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - IMUNOFLUORESCENAAnticorpi marcai cu fluorocromDetecia i identificarea antigenelor de la nivelul celulelor infectate (produs patologic, culturi de celule)

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - IMUNOFLUORESCENA

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - IMUNOHISTOCHIMIEDetecia i identificarea antigenelor virale de la nivelul celulelor infectate (produs patologic, culturi de celule)Anticorpi marcai cu peroxidazExaminare la microscopul opticDezavantaj peroxidaza endogen, prezent n numeroase esuturi, poate genera reactii fals pozitive

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - IMUNOHISTOCHIMIE

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - IMUNOHISTOCHIMIE

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - IMUNOHISTOCHIMIE

  • Rabie - imunohistochimie

  • Incluzii IN Cowdry A se vad uneori; Imunohistochimie, utilizand Ac monoclonali anti- VHS: semnal (+) IN si IC (stanga coloratie Papanicolau si dreapta: IHC, dupa recolorare)

  • METODE INDIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC Evidenierea anticorpilor specifici metode imunoenzimatice (ELISA) latexaglutinare (LA) reacia de fixare a complementului (RFC) / evidentiaza Ac specifici de grup (exceptii / VSR, paragripal tip 3) reacia de inhibare a hemaglutinrii (RIH)Sensibilitate, specificitate, complexitate i costuri funcie de metoda utilizatCriterii de semnificaie a prezenei Ac

  • Criterii de semnificaie a prezenei Ac2 probe de ser (ideal)dinamica semnificativseroconversia1 prob unictitrul semnificativclasa de Ac (IgM versus IgG)

  • METODE IMUNOENZIMATICE N DIAGNOSTICUL VIROLOGIC Aplicaii extrem de variateDiverse variante (directe, indirecte, competitive, sandwich)Detecia i identificarea antigenelor (virioni, antigene virale solubile, celule infectate) si a anticorpilorSensibilitate foarte bunSpecificitate funcie de afinitatea anticorpilorAccesibilitateCost redus

  • Teste pe membrana

  • Teste pe membrana (HIV si VHC)

  • Teste pe membranaPentru laboratoare putin dotateNU NECESITA PERSONAL SPECIALIZATIn zone unde prevalenta infectiei respective este redusaSE CONFIRMA OBLIGATOR PRIN ELISA

  • ELISA- principiuEvidenierea complexului Ag-Ac cu ajutorul unui element cunoscut (Ac sau Ag) marcat cu o enzimReacia de culoare, prin adugarea unui substrat specific (pentru enzima utilizat)

  • Placa ELISA (12/8)

  • ELISA - metodaAg partial purificat, inactivat este adsorbit pe suport

    Se adauga ser (poate contine Ac se cupleaza de Ag)

  • ELISA - metodaAc anti Ig umana, cuplati cu enzima (conjugat)

    Cromogenul (substratul) va schimba culoarea reactiei daca se formeaza complexul Ag-Ac-Conjugat

  • ELISA ser reactiv

  • ELISA ser nereactiv

  • ELISA

    Positive ControlNegative ControlPatient APatient BPatient CAssay Control1.6890.153O.0550.4121.9990.123

  • ELISAindirect

  • ELISAindirect

  • ELISA

  • ELISA direct (detectare de Ag)

  • ELISA

  • ELISA competitivcompetiia se realizeaz direct n prezena de Ac dirijai mpotriva Ag insolubilizat, prin adsorbia pe faza solid. este posibil s adugm reactivii n etape: n prima etap, Ag-ul de dozat se adaug peste Ac insolubilizai pe faza

  • ELISA competitiv

  • ELISANu se lucreaza probe hemolizate, contaminate!Pastrarea serului cel mult 5 zile la frigider (ideal, maxim 3 zile).Nu se ingheata proba repetat!

    Rezultate fals pozitive: impun repetarea probei pe 2 godeuri (mai ales in cazul probelor indeterminate; AS = CO).

  • Surse de eroare n dozarea antigenelor:

    rezultatele fals pozitive pot fi determinate de:* fixarea nespecfic a imunoglobulinelor de ctre receptori Fc membranari sau de ctre factorul reumatoid (FR) prezeni n ser sau alte lichide biologice;* reacii heterospecifice determinate de utilizarea anticorpilor anti-antigene heterologe, anti-gazd sau anti-membrane ale gazdei sau de prezena de antigene n prob (bacterii, levuri, ciuperci, proteine);

  • Surse de eroare n dozarea antigenelor:* proasta conservare a serurilor ce duce la alterarea imunoglobulinelor n prob;* folosirea unui conjugat la titru sau cu o aviditate insuficient.

  • Surse de eroare n dozarea antigenelor:Rezultate fals negativeAviditate scazuta a Ac adsorbiti pe suportConjugat nelegat (incubare insuficienta, spalare in exces, etc)

  • ELISAConduita: repetarea pe aceeasi proba sau/si pe o noua proba de ser (recoltat imediat sau/si la 2-3 luni interval).Se prefera repetarea pe truse de la producatori diferiti.Atentie: pacienti cu boli autoimune, sub tratament cu cortosterioizi, hemodializati, etc.

  • ELISARezultate fals negative:ser recoltat anterior perioadei de seroconversieAc complexati/legai cu Agsensibilitate redusa a truseiAc antiHIV2 nu sunt recunoscuti de truse pentru HIV1imunsupresie

  • Evoluia rspunsului imun n infecia cu HIV

  • ELISA schematic (indirect)

  • ELISA Ag p 24 (HIV)

  • Sandwich ELISA (Ac-Ag-Ac)

  • IgG-Capture EIASerum (1/100)Biotin-Labeled AgStrepavidin-PeroxidaseTMBSubstrateGoat-anti-Human-IgGCapture Antibody

  • ELISARezultate fals pozitiveConfirmarea printr-un test principial diferit (WB, IF).

  • HIV WB

  • WB - principiuAg virale fixate pe un suport (membran), reacioneaz specific cu Ac din serMarcaj imunoenzimaticLegarea reactivilor ca in ELISA de tip indirect

  • WBAvantaje: evidentiaza categorii de Aceste mai specificapermite aprecieri prognostice (ex. aparitia/versus disparitia Anti- p24).

  • WBDezavantaje:timp mai mare de executiepresupune dotari suplimentarepersonal super-calificatuneori presupune interpretari subiectivecost ridicat

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC LATEX AGLUTINAREAnticorpi fixai pe particule de latex identific antigene (reciproca este valabil, pentru evidenierea de Ac)Metod simpl, rapida i accesibilSensibilitate i specificitate relativ reduseEx: antigenul rotaviral in materii fecale

  • LA

  • METODE DE BIOLOGIE MOLECULAR N DIAGNOSTICUL VIROLOGIC Detecia i identificarea unor secvene specifice de acizi nucleiciDiverse varianteHibridizarea acizilor nucleici neamplificaiAmplificarea semnalului (bDNA)Amplificarea secvenei (PCR, RT-PCR, NASBA)Sensibilitate i specificitate foarte buneAccesibilitate restrnsCost ridicat, dar cu raport cost/beneficii favorabil

  • PCR

  • PCR evidenierea fragmentului amplificat

  • Detectarea calitativ a acizilor nucleici virali

    Cand metodele convenionale sunt greu de utilizat:virusurile care se cultiv dificil (VHB, VHC, papillomavirusul uman, HIV i parvovirusul B19);datorit riscului crescut de infeciozitate (HIV);cnd serologia nu este evident (ex. n cazul pacienilor imunocompromii- virusul citomegalic);diagnosticul infeciilor virale congenitale i perinatale (HIV, VHC);virusul este prezent n concentraii foarte joase: screeningul sngelui i al produselor sanguine (VHB, VHC, HIV);

  • Produse patologicetestarea fluidelor organismelor care n mod normal sunt sterile- LCR (VHS, VVZ, VCM); lichidul amniotic (VVZ, VCM, parvovirusul B19, virusul rubeolei);fluidele oculare (VVZ, VCM).

  • PCRAu fost folosite variate metode pentru aceste scopuri, inclusiv PCR i hibridizarea, cu scopul de a putea evidenia concentraii sczute de genom viral n probe.

  • Secvenierea acidului nucleic viral

    Odat ce genomul viral a fost detectat, secvenierea genomului poate evalua relaiile dintre dou sau mai multe izolate virale, n cazurile n care este posibil coinfecia (VHB VHC) sau poate ghida terapia antiviral. n testarea rezistenei la antitretrovirale a HIV se determin secvenierea RT i a proteazelor i se compar expresia schimbrilor aminoacizilor cu tulpina iniial de virus. Testarea sensibilitii HIV la antiretrovirale are un potenial limitat datorit beneficiului clinic redus, costurilor ridicate, dificultilor de interpretare.

  • Secvenierea acidului nucleic viral

    Aplicaii: alegerea terapiei de prim intenie, adaptarea terapiei, profilaxia post expunere i prevenia transmiterii verticale. Ex. terapia HIV i VHC. rspunsul la IFN n infeciile cu VHC depinde de genotipul viral: genotipurile 2 i 3 rspund mai bine dect genotipul 1; cteva variante de VHB cu sensibilitate redus la Lamivudin sunt asociate cu prezena unui singur nucleotid la nivelul genei care codifica sinteza polimerazei.

  • Cuantificarea acidului nucleic viral

    Cuantificarea ncrcturii virale este important n virusologia clinic datorit utilitii sale ca:indicator al prognosticului;al rspunsului la terapia antiviral;al riscului transmiterii infeciei.

  • Evaluarea prognosticului:

    A fost bine stabilit pentru HIV. Sa demonstrat c nivelul plasmatic al ARNului viral corelat cu stagiul bolii i cu un nivel sczut al HIV1 n plasm se asociaz cu o lung perioad asimptomatic.Incrctura viral crescut dup seroconversie poate preceda progresia spre SIDA.

  • Evaluarea prognosticului:

    Msurarea ncrcturii virale pentru VCM este util n cazurile post transplant, aceast metod dovedinduse mult mai eficient dect determi-narea calitativ. Incrctura viral pentru VCM este un factor predictiv independent n supravieuire, n cazul SIDA avansat.Creterea VEB n plasm i n limfocitele din sngele periferic poate precede apariia unor tulburri limfoproliferative post transplant.

  • Evaluarea rspunsului terapeutic:

    este cel mai bine cunoscut n cazul infeciei cu HIV, caz n care scopul terapiei este de a reduce nivelul plasmatic al HIV1 ct mai mult posibilexist controverse n acest sens;s-a sugerat c pacienii cu nivelul plasmatic al HIV1 ntre 30.000 i 50.000 cpii / ml ar trebui s primeasc terapie antiretroviral indiferent de stadiul clinic, n timp ce pentru pacienii care au concentraii ntre 5000 30000 cpii / ml trebuie s se aib n vedere i stadiul clinic i numrul CD4 pentru iniierea terapiei antiretrovirale.

  • Evaluarea rspunsului terapeutic:Terapia antiretroviral este eficient dac s - a redus nivelul plasmatic al HIV1 cu cel puin 0,5 log10. Revenirea nivelului ARN ului plasmatic pn la valori egale cu cele dinaintea terapiei, ar trebui s trezeasc suspiciuni cu privire la dezvoltarea rezistenei.

  • Evaluarea rspunsului terapeutic:n cazul HVB, n care un nivel crescut de ADN nainte de iniierea tratamentului este asociat cu un rspuns slab la IFN, cuantificarea ADN/ VHB a fost utilizat pentru a preconiza rspunsul terapeutic i pentru a monitoriza rspunsul la terapia antiviral. La fel i n cazul infeciilor cu VHC, nivelul ridicat al viremiei, naintea iniierii terapiei antivirale este asociat cu un rspuns terapeutic redus (s-a demonstrat c acesta apare indiferent de genotip). Este nc neclar care este raportul dintre genotipul VHC i nivelul viremiei.

  • Evaluarea riscului transmiterii virale:

    cuantificarea genomului viral pentru a evalua riscul transmiterii virale nu este frecvent utilizat n prezent, dar poate deveni mult mai important n viitor;este general acceptat c riscul transmiterii virale este corelat cu nivelurile crescute de virus n diverse fluide ale organismului;transmiterea VHC de la mam la copil este mai frecvent atunci cnd nivelul ARN / VHC al mamei n snge este mai mare dect 108 cpii / ml (practic risc = 0 la 103 cpii / ml ). Transmiterea se face frecvent n timpul nateriii; frecvena ratei transmiterilor este mai mic n cazul naterilor prin cezarian dect n cazul naterilor pe cale natural.

  • Evaluarea riscului transmiterii virale:

    n ceea ce privete transmiterea mama-fat n cazul HIV1, s-a demonstrat, dei inconstant, c nivelurile ridicate ale ARN / HIV n plasma mamei cresc riscul infeciilor fetale. Scderea riscului transmiterilor se poate face eficient prin Zidovudin. O meta analiz recent ce a inclus 15 studii de cohort sugereaz c naterea prin cezarian reduce riscul transmiterii HIV pe cale vertical, indiferent de utilizarea Zidovudinei.Nivelurile crescute de HIV1 apar mai frecvent n timpul relaiilor heterosexuale.

  • Metode cantitative Real Time pCR (LP cu demonstratii practice)

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - CULTIVAREMetod standard permite stabilirea semnificaiei izolatului testarea sensibilitii la antivirale izolarea unor virusuri noilaborioas, necesit infrastructur complex i personal calificataccesibilitate redus i costuri mari

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - CULTIVAREPrelucrarea produsului patologicMedii de cultur celulare culturi de celule (primare, diploide, linii celulare) ou embrionate animale de laborator

  • METODE DIRECTE DE DIAGNOSTIC VIROLOGIC - CULTIVAREEvidenierea replicrii virale efect citopatic incluzii hemadsorbie hemaglutinare imunofluorescen, metode imunoenzimatice transformare malign interferen

  • CULTIVAREA VIRUSURILOR EFECT CITOPATIC - sincitii

  • Virus urlian : CC- sincitii (se confunda cu cele ale VRS diferentiere prin testul de hemadsobtie)

  • CULTIVAREA VIRUSURILOR INCLUZII VIRALE

Recommended

View more >