Dans une cellule eucaryote : La queue poly A est ajoutée après la transcription

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    21-Jan-2016

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Dans une cellule eucaryote : La queue poly A est ajoute aprs la transcription Les ARN ribosomaux et les ARNm sont synthtiss par la mme ARN polymrase. La coiffe est le 7-mthyl cytosine On peut produire deux ARNm partir dun seul transcrit primaire Pour transformer des bactries: - PowerPoint PPT Presentation

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Dans une cellule eucaryote:La queue poly A est ajoute aprs la transcriptionLes ARN ribosomaux et les ARNm sont synthtiss par la mme ARN polymrase.La coiffe est le 7-mthyl cytosineOn peut produire deux ARNm partir dun seul transcrit primairePour transformer des bactries:Prendre les bactries dans la phase exponentielle Mettre les bactries dans un tampon qui contient NaClAjouter X-galFaire un choc thermique 42CUne sonde dADN est:Trs souvent radioactive, marque avec lisotope 35 STrs souvent radioactive, marque avec lisotope 32 PUtilise pendant le criblage des banques dADNPeut tre synthtise en utilisant lenzyme KlenowPendant la traduction dun ARNm:LARN est lu par le ribosome dans le sens 5-3Le codon AUG code pour le premier acide aminLe codon AUG code pour lacide amin lextrmit C-terminal de la protineLes codons Stop sont UAA, UGA et UAGPendant le criblage dune banque dADN:On traite les membranes avec de la soude pour dnaturer lADNOn fait toujours lhybridation 65CLa sonde na pas besoin dtre dnatureLa sonde est toujours un oligonuclotide de 6 9 nuclotidesLa molcule dARN de transfert:Est transcrit dans le cytoplasme chez les eucaryotesPorte un anticodonFixe un acide aminReconnat un anticodon sur lARN messagerLes enzymes de restriction sont:Des exonuclasesDes endonuclasesSynthtises par des bactriesUtilises normalement 4CPendant la rplication de lADN:Les chanes dADN sont synthtises partir dune amorce dARNLes fragments dOkazaki se produisent sur le brin prcoceLes erreurs sont limines par une activit 5-3 exonuclaseLes deux brins dADN restent spars grce aux hlicasesEn ce qui concerne linformation gntique dans le noyau dune cellule humaine:La majorit de lADN code des protinesLes gnes qui codent des protines ont tous la mme tailleLes tlomres se situent au centre des chromosomesLe nombre de nuclotides est peu prs mille fois plus important que dans une bactrieLesquels des constats suivants sont vrais:La nuclase S1 digre lADNLa Klenow a une activit 5-3exonuclaseLa transcriptase inverse peut copier lADN en ARNLe clonage avec des extrmits franches permet dorienter linsertLa PCR (Polymerase Chain Reaction):La synthse de lADN est toujours dans le sens 5-3On peut se servir pour ajouter des sites de restrictionOn dnature lADN 72COn utilise des amorces dARNDans une banque dADNceucaryote:On ne trouve que les squences qui codent des acides aminsOn ne trouve pas la squence des promoteursOn trouve toujours la squence Poly dA une extrmit La taille de la banque est le nombre de colonies recombinantes indpendantes produites aprs la transformation des bactries par le produit de la ligationLa transcription chez les eucaryotes : Est toujours faite par lARN polymrase IIEst inhibe par lampicillineEst ralise par une ARN polymrase ADN dpendanteCorrespond llongation dune chane dARN dans le sens 3-5Pour faire une raction PCR il faut:Deux amorces complmentairesPurifier le fragment dADN quon veut amplifierUne ADN polymrase qui est stable 95CUne ligaseLa transcriptase inverse est capable de :Synthtiser de lARN partir de lADNSynthtiser de lADN partir de lARNSynthtiser lADN sans besoin dune amorceFaire la duplication de lADN monocatnaire (= simple brin)Au cours dun Southern blot:il faut raliser une digestion partielle de lADN gnomique avec une enzyme de restrictionil faut transfrer les fragments dADN gnomique sur une membrane pour les rendre accessibles la sondeil faut transfrer les fragments dADN gnomiques sur une membrane par capillariton peut utiliser de lADN de sperme de saumon afin daugmenter la stringence pendant lhybridationLors de la transgnse vgtale:lADN de transfert sintgre toujours au mme endroit dans le gnome vgtaleon ralise une co-culture de cellules vgtales et dagrobactriesIl faut ajouter des hormones ( auxines, cytokinines)on utilise un virus pour infecter les plantesOn sait que le gne Sry dcide le sexe dune souris parce que:les souris XY et transgnique pour le gne Sry sont des mlesles souris XX et transgnique pour le gne Sry sont des mlesles souris XY dpourvues du gne Sry sont des mles les souris XY dpourvues du gne Sry sont des femellesLa technique des puces ADNnous permet de:tudier lexpression des gnes dans un cas prcis comparer deux lots dARNm marqussquencer plusieurs gnesidentifier des gnes en relation avec certaines maladies gntiques Si je veux comparer un mme tissu dans des conditions diffrentes. Je choisirais prfrentiellement danalyser:Le gnomeLe transcriptomeLe protomeLes rgions non-codantes du gnomelors de la rgnration de plantules partir de cals:un excs dauxines par rapport aux cytokinines entraine la formation de racines un excs dauxines par rapport aux cytokinines entraine la formation de bourgeonsune concentration quivalente de cytokinines et dauxines entraine la formation de cals un excs de cytokinines par rapport aux auxines entraine la formation de bourgeonsAu cours de la ralisation dune exprience de Western blot, on devra:faire migrer des protines sur un gel dagarose en prsence de SDS qui est un dtergentraliser un transfert (ou blotting) en respectant lordre suivant: lectrode positive, papier imbib dlectrolyte, gel contenant les protines, membrane de nitrocellulose, papier imbib dlectrolyte, lectrode ngativesaturer la membrane de nitrocellulose avec du lait ou de la BSA utiliser un anticorps primaire spcifique de la protine que lon souhaite dtecterPour produire des souris transgniques:il faut injecter le transgne avant la premire division cellulairela slection avec G418 est essentielleil faut des mles vasectomissil faut utiliser les deux hormones LH et FSH pour rendre des femelles pseudo-gestanteJe veux hybrider des ADNc marqus radioactivement sur une puce ADN:Je contrle la temprature et la concentration en selsPlus je serais dans des conditions de forte stringence moins lhybridation sera spcifiquePlus ma concentration en sels est basse plus jaugmente la stringenceJai deux conditions diffrentes analyser, je peux mlanger ces ADNcDans le systme de transgnse vgtale, le vecteur binaire est un plasmide:dpourvu de lADN de transfertqui ne porte pas de gnes de synthse dauxine et de cytokinine.de taille denviron 10 12 kbqui porte la rgion de virulenceUn anticorps secondaire utilis en Western blot:reconnait lanticorps primaire et sy fixereconnait la protine que lon souhaite dtecter et sy fixe reconnait une enzyme appele HRP et sy fixepermet de saturer la membrane afin que lanticorps primaire ne sy fixe pasEn ce qui concerne la production dune souris knock-out il faut:injecter un gne dans le pro-noyau mleles souris mles vasectomisescibler les deux allles du gne dans les cellules ES (cellules souche)slectionner avec G418 les cellules o le gne t cibl Les plasmides Ti des agrobactries:contiennent des gnes dorigine de rplication eucaryotes contiennent une rgion vir portant lADN de transfertOnt t dvelopps dans une laboratoirepossdent des gnes impliqus dans la synthse des hormones vgtalesQuand on utilise le systme cre-lox:il faut mettre les sites lox dans un exonla souris qui exprime le cre est une souris transgniquele cre est une enzyme de restrictionAvec un cre sous le contrle dun promoteur inductible on peut dcider quel moment on efface un gneEn utilisant les puces ADN, il est possible:danalyser des mutations au niveau de lADNdidentifier des microorganismes prsents dans leaudtudier les protinesde diagnostiquer des maladies infectieusesBiologie en AnglaisBiologie en Anglais est un UEL pour les tudiants en biologie de la premire anne. Les intervenants font des prsentations en anglais sur leur recherche et les discussions suivent les prsentations. Lide est de sensibiliser des tudiants sur limportance danglais dans le monde scientifique et il est aussi une vitrine pour les laboratoires sur le campus.Exam: Chaque tudiant fera une prsentation orale de 20 minutes en anglais. Une partie de la note se base aussi sur la prsence aux cours.UEL de 3 crditsResponsable: Pr Keith DudleyUEL pour les Biologistes S2UEL dun livre de cours la rechercheS2 Biologie: 24 tudiantsCette UE propose de faire un lien entre un livre de cours de biologie: le livre Molecular biology of the cell, et des sujets de recherche actuellement dvelopps dans les laboratoires du campus. Les tudiants organiss en petits groupes auront choisir parmi diffrents sujets de recherche proposs par les enseignants chercheurs impliqus dans cette option. Le groupe dtudiants devra rechercher des informations permettant dexposer lensemble des tudiants inscrits dans lUE, des notions, des principes et les grands axes de recherche lis cette thmatique. Lacquisition de notions de base se fera par la lecture de chapitre du livre en anglais Molecular biology of the cell permettant dapprendre, ou de se familiariser, avec la terminologie scientifique en anglais (langue couramment employe dans les laboratoires de biologie). Le travail de recherche sera encadr par les enseignants au cours de runions hebdomadaires. Le travail de recherche sera expos devant lensemble des tudiants. La note finale sera compose de trois partie: une note sur le travail de recherche effectu; une sur la prsentation; une sur des rponses apportes un questionnaire. Yannick AzouUEL S2 Biologie La Gntique Lo KurzObjectif:Donner aux tudiants une vue gnrale des problmes relatifs la transmission des caractres hrditaires tel que dcrit par Mendel et Morgan, mais aussi matriser le vocabulaire, les dfinitions et la nomenclature utiliss en Gntique classique . Comprendre l'importance et les enjeux de la gntique dans la biologie moderne. Principalement base sur des raisonnements logiques, cette discipline particulirement formatrice est toujours d'actualit paralllement l'essor prodigieux pris de nos jours par la gntique molculaire et le squenage systmatique. L'enseignement se fera partir de cours introductifs suivis d'exercices comments et expliqus en relation avec les diffrents sujets traits.Effectif:Pas de limite.Evaluation:Examen final. Pas de TP.Support:Livret en dpt la reprographie.

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